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影響陽(yáng)離子脂質(zhì)材料轉(zhuǎn)染效率的常見(jiàn)因素

更新時(shí)間:2022-06-07   點(diǎn)擊次數(shù):946次
  陽(yáng)離子脂質(zhì)材料在經(jīng)轉(zhuǎn)染和表達(dá)過(guò)程中,有諸多因素均會(huì)影響表達(dá)效率,如細(xì)胞所處的周期、脂質(zhì)體與質(zhì)粒的比例、質(zhì)粒DNA的大小及構(gòu)型、脂質(zhì)體/DNA復(fù)合物的正負(fù)電荷比例和大小等。
  
  影響因素:
  
  1、細(xì)胞所處的周期
  
  細(xì)胞轉(zhuǎn)染是一個(gè)多步驟、復(fù)雜的過(guò)程,包括細(xì)胞攝取、胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)和核孔轉(zhuǎn)運(yùn)。目前普遍認(rèn)為抑制DNA釋放的因素以及DNA進(jìn)入細(xì)胞核的干擾因素,均對(duì)陽(yáng)性脂質(zhì)體介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染產(chǎn)生重要影響。細(xì)胞在有絲分裂時(shí),外源性DNA更容易被細(xì)胞核攝取。
  
  由此認(rèn)為,DNA進(jìn)入細(xì)胞核的一個(gè)主要機(jī)制是依賴于細(xì)胞分裂時(shí)的有絲分裂被動(dòng)進(jìn)入胞核。此外,脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染效率還跟轉(zhuǎn)染時(shí)間、轉(zhuǎn)染細(xì)胞的類型、轉(zhuǎn)染細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)及融合程度等因素有關(guān)。
  
  2、質(zhì)粒DNA的大小及構(gòu)型
  
  有相關(guān)研究把陽(yáng)離子脂質(zhì)材料作為基因載體,并將3種構(gòu)型(超螺旋、開(kāi)環(huán)和線型)的質(zhì)粒DNA分別轉(zhuǎn)染Vero細(xì)胞,結(jié)果發(fā)現(xiàn)超螺旋質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)染效率高。
  
  此外,也有實(shí)驗(yàn)表明小于100bp的DNA片段可以在細(xì)胞質(zhì)中自由移動(dòng)。然而隨著DNA片段的增大,其在細(xì)胞質(zhì)中的遷移能力也隨之降低。這是由于核孔對(duì)于進(jìn)入細(xì)胞核的DNA有大小限制的作用。
  
  3、脂質(zhì)體/DNA復(fù)合物的正負(fù)電荷比例和大小
  
  脂質(zhì)體/DNA復(fù)合物中兩者的正負(fù)電荷比例是影響基因轉(zhuǎn)染效率的重要因素。其中的一個(gè)重要原因是,兩者所帶電荷比例可直接影響復(fù)合物的粒徑,而當(dāng)復(fù)合物的直徑尺寸在0.4-1.4um范圍內(nèi)時(shí),具有較高的轉(zhuǎn)染效率。
  
  以上是影響陽(yáng)離子脂質(zhì)材料轉(zhuǎn)染效率的幾個(gè)常見(jiàn)的因素,在這些影響因素中,對(duì)無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基的開(kāi)發(fā)和利用無(wú)疑是提高細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的一條重要途徑。
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